肉的宰后嫩化基本归因于肌原化学纤维板素组成部分的伤害，肌原化学纤维板素组成部分是由内源性血清油脂水解表现酶化学降解塑料肌原化学纤维板素和内部骨架血清应该会导致的。与十几年来持续是注重焦聚的钙血清酶不一样的，胱天血清酶（caspases）最近的变成了感想法的时候题。胱天血清酶在内部凋亡的下达周期起着至关极为重要的效用，表中caspase-3在去世血清油脂水解表现中的效用是相互面和简化的，所以说需要进一点论述。S-亚硝基化应该通过自动调高钙挥发释放、养分分泌、血清质化学降解塑料和内部凋亡来自动调高肉肥，以及嫩度和持水本事。下一步论述察觉到S-亚硝基化应该调低依耐线粒体的caspase-3级联表现，这应该是肌肉群内部凋亡和牛肉片品质质量波动的原故。caspase-3的论述重点村是其与内部凋亡的关心，当然，不多有论述研究方案S-亚硝基化自动调高caspase-3的工作机制。

2024年9月由无锡种植业二本大学张万刚客座教授专业团体在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱怪物为该研究提供了亚硝基化装饰组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

常常文章标题：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

中文核心期刊：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2023年决定系数：5.7

发过耗时：2024年9月

买家行业：南京农业大学

分析原材料：蛋白

拜谱提供了水平：亚硝基化修饰组学

技术工艺路线规划：

一、探索导致

01.Caspase-3活性酶

如今尚不看不清楚NO对caspase-3的抑止做用可不可以归因于NO介导的S-亚硝基化，有所差异酸度系数的GSNO看作外源性NO现货供应，以分析caspase-3的体内S-亚硝基化。可是表面，与都没有GSNO的组对比，100、200和400μM GSNO组的caspase-3渗透性偏态消减（图1），与仍然新闻稿共同。GSNO治疗消减caspase-3渗透性的内在原由仍仍待揭示。

图1 有所不同含量的GSNO工作对caspase-3生物的的影响

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化情况

分析Caspase-3的亚硝基化的的程度，以指出GSNO对Caspase-3的产生反应性。经GSNO操作后，加测到caspase-3核蛋白S-亚硝基化屈服强度提升（图2）。等最后表示，外源性GSNO锻炼可出色介导caspase-3的体内S-亚硝基化。引人难以相信的是，在找不到GSNO会有的剖析组中加测到其中一个较弱的S-亚硝基化带，这表示caspase-3将会产生内源性的S-亚硝基化。除外，本分析中caspase-3的S-亚硝基化的的程度高高，而caspase-3的亲水性降低，这与的时候的分析高度。所以，caspase-3的特女性朋友S-亚硝基化表达位点尚不明确，还需用进十步的生命的进化。

图2 GSNO处理对caspase-3S-亚硝基化技术水平的导致

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化掩盖组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的队列。蓝色的符号图片的队列透露S-亚硝基化肽，粉红色符号图片的C透露S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱仪

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3挥发结蛋白酶

结球淀粉酶当做一种生活关键的组织核骨架球淀粉酶，在确保肌组织核格局的格局全面性和膨胀性方位起着关键效应，分析S-亚硝基化caspase-3对结球淀粉酶生物吸附的神经敏感度和理性有关键必要性。与Std（未用胱天球淀粉酶酶-3和GSNO孵育的缺省肌合成黏胶纤维球淀粉酶）组好于，0 μM GSNO组（肌原合成黏胶纤维和caspase-3的孵育，无GSNO）的全面结球淀粉酶成分不错变低，表示caspase-3对结球淀粉酶有暗藏的球淀粉酶油脂水解能力素质。在GSNO孵育后，全面结球淀粉酶的成分分明增高（P < 0.05）。于此，当GSNO技术提高时，全面结球淀粉酶的成分延续调涨（P < 0.05）（图5）。这一项发现得出结论，SNO表达的caspase-3以技术依赖于的习惯可抑制结球淀粉酶的生物吸附。

图5.S-亚硝基化caspase-3降解塑料结核蛋白

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3可降解肌钙蛋白质-T

肌钙血清-T (TnT)是原肌球血清的缓解开展健身肌肉缩水的丝条的有必须肌原食物玻璃合成纤维血清。TnT的可化学化学生物挥发优点是论文加测到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化先决条件下，caspase-3对TnT的可化学化学生物挥发实际情况下图6如下图所示，与Std组（含有caspase-3和GSNO的肌原食物玻璃合成纤维）相对比，caspase-3组中30 kDa TnT场面偏态新增，看到caspase-3积极参与了TnT的可化学化学生物挥发，除此以外，caspase-3与GSNO的孵育使得30 kDa TnT回落。在100和200 μM GSNO组中沒有论文加测到很明显的之间的关系(P > 0.05)，而当GSNO的酸度完成400 μM 时，该场面偏态少(P < 0.05)。等看到看到了SNO淡化的caspase-3对TnT可化学化学生物挥发的遏做用。结血清和TnT是caspase-3的太敏感底物，而GSNO处置大幅度大幅度降低caspase-3的活力性或者使得肌原食物玻璃合成纤维血清可化学化学生物挥发层面大幅度大幅度降低。上面所诉，NO诱发的S-亚硝基化是可以在淡化半胱氨酸残基来的缓解caspase-3的活力性，转而进步骤引响其对结血清和TnT的血清溶解特性，而使引响牛肉片品行。

图6. S-亚硝基化caspase- 3分解肌钙蛋清-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、工作小结

本设计亟需刍议S-亚硝基化对caspase-3表达的后果以及其接着对羊肉肌原纤维板素离体分解的后果。球淀粉酶酶S-亚硝基化能够表达caspase-3的半胱氨酸残基，最后导至caspase-3吸附性降低了，进几步减缓了其对羊肉肌原纤维板素球淀粉酶酶的球淀粉酶酶油脂水解程度。

三、拜谱个人总结

学习讲解采用了了酶活讲解，亚硝基化突显组学讲解，WB等检侧技术，遇到血清S-亚硝基化就能够突显caspase-3的半胱氨酸残基，这产生了caspase-3亲水性的大幅度降低，相结步抑制作用了其对羊肉肌原钎维血清的血清淀粉水解水平。本学习讲解为理解血清质亚硝基化对色泽的调整共识机制打造新一个新的视觉。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的高血清质组学、突显高血清质组学、分解组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸系列拜谱生物食品，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺硝化作用、total空气氧化还原系统、存在巯基，欢迎大家咨询！

参考使用资料：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663